腺病毒包裝

▏ 服務(wù)原理

腺病毒包裝技術(shù)主要原理是將目的片段克隆到腺病毒表達(dá)載體上，表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒通過重組導(dǎo)入腺病毒包裝細(xì)胞進(jìn)行包裝，包裝好的病毒進(jìn)一步進(jìn)行擴(kuò)增和滴度測(cè)定。

▏ 服務(wù)簡介

腺病毒是一種線性雙鏈DNA病毒，由于其具有宿主范圍廣、可感染分裂和非分裂細(xì)胞、高滴度制備、外源基因裝載容量大等優(yōu)點(diǎn)，重組腺病毒已越來越廣泛地被應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床試驗(yàn)中，并成為世界上最常用的基因治療載體之一。

▏ 服務(wù)優(yōu)勢(shì)

可感染的細(xì)胞種類多，宿主廣泛;
感染效率高，特別適合質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染效率低的細(xì)胞，如原代細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等，且目的蛋白表達(dá)水平高;
可包裝大片段的外源基因，高達(dá)10kb;
不整合到細(xì)胞染色體中，生物安全性高。

科佰生物擁有豐富的病毒包裝經(jīng)驗(yàn)，成功為很多客戶包裝出需要的病毒。公司提供2種較常用的系統(tǒng)：AdEasy、AdMAX。

AdEasy系統(tǒng)：
AdEasy包裝系統(tǒng)主要的特點(diǎn)是利用Cre/loxP系統(tǒng)在大腸桿菌(BJ5183)中完成外源基因插入腺病毒基因組的過程，獲得環(huán)狀的重組腺病毒基因組，并且具有在細(xì)菌中復(fù)制的必需元件。將重組腺病毒基因組酶切線性化后轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，避免了雙質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染得到重組腺病毒。

使用這個(gè)系統(tǒng)需要注意以下問題：
1.要用能表達(dá)Cre重組酶的特定的大腸桿菌，建議建立菌種庫以免細(xì)菌發(fā)生變化;
2.由于重組是在細(xì)菌中發(fā)生的，微小的基因組變化不易發(fā)現(xiàn);
3.要獲得高品質(zhì)的重組腺病毒毒種(高病毒產(chǎn)量、高目的基因表達(dá))應(yīng)挑選多個(gè)重組腺病毒質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，獲得多個(gè)重組病毒來篩選。

可根據(jù)不同的研究需求構(gòu)建腺病毒穿梭載體，如用于RNAi的腺病毒載體、用于基因過表達(dá)的腺病毒載體、用于啟動(dòng)子活性研究的腺病毒載體等

AdMAX系統(tǒng)：
AdMax包裝系統(tǒng)是通過Cre/loxP 獲得重組病毒，這個(gè)過程發(fā)生在HEK293細(xì)胞中，從而避免在細(xì)菌中重組。將克隆了外源基因的腺病毒穿梭質(zhì)粒與攜帶了腺病毒大部分基因組的包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，利用Cre/loxP系統(tǒng)的作用實(shí)現(xiàn)重組，產(chǎn)生重組腺病毒。這個(gè)系統(tǒng)有多種優(yōu)勢(shì)，包括操作簡便、重組效率高、獲得的病毒產(chǎn)率高、目的基因的表達(dá)水平高(因?yàn)閙CMV啟動(dòng)子比hCMV啟動(dòng)子強(qiáng)若干倍)等。

可根據(jù)不同的研究需求構(gòu)建腺病毒穿梭載體，如用于RNAi的腺病毒載體、用于基因過表達(dá)的腺病毒載體、用于啟動(dòng)子活性研究的腺病毒載體等

▏ 服務(wù)流程

1）獲得目的基因序列;
2）構(gòu)建病毒表達(dá)載體質(zhì)粒;
3）表達(dá)載體質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒重組;
4）感染HEK293，包裝出病毒;
5）病毒擴(kuò)增、濃縮;
6）滴度測(cè)定。

▏ 服務(wù)說明

1）客戶提供目的基因的序列，如果提供模板，請(qǐng)告知載體、酶切穩(wěn)點(diǎn)等信息;
2）默認(rèn)使用AdEasy系統(tǒng)，有明確要求請(qǐng)告知;
3）序列過長可能影響病毒滴度;
4）目的蛋白的功能驗(yàn)證另外收費(fèi)。